重組蛋白其獲得途徑可以分為體外方法和體內(nèi)方法。兩種方法的前提都是應(yīng)用基因重組技術(shù)，獲得連接有可以翻譯成目的蛋白的基因片段的重組載體，之后將其轉(zhuǎn)入可以表達(dá)目的蛋白的宿主細(xì)胞從而表達(dá)特定的重組蛋白分子。當(dāng)前重組蛋白的生產(chǎn)主要有四大系統(tǒng);1.原核表達(dá)系統(tǒng)：常用的大腸桿菌蛋白表達(dá)，真核表達(dá)系統(tǒng)如酵母，哺乳動(dòng)物細(xì)胞蛋白表達(dá)（常用的細(xì)胞CHO，HEK293）及、昆蟲(chóng)細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)。重組蛋白的產(chǎn)生尚可利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的乳腺或者植物產(chǎn)生，產(chǎn)生的重組蛋白作為生物制藥的產(chǎn)物，在醫(yī)學(xué)中作用顯著。利用基因工程技術(shù)，可以使細(xì)胞或者動(dòng)物本身變成“批量生產(chǎn)藥物的工廠”。
以利用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的乳腺表達(dá)重組蛋白為例：其方法是將藥用蛋白基因與乳腺蛋白基因的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起，通過(guò)顯微注射等方法，導(dǎo)入哺乳動(dòng)物（哺乳動(dòng)物才會(huì)泌乳）的受精卵中，然后，將受精卵送入母體內(nèi)，使其生長(zhǎng)發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物進(jìn)入泌乳期后，可以通過(guò)分泌的乳汁來(lái)生產(chǎn)所需要的蛋白質(zhì)藥品，因而稱為動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器或乳房生物反應(yīng)器。目前，科學(xué)家已在牛和山羊等動(dòng)物的乳腺生物反應(yīng)器中表達(dá)出了抗凝血酶、血清白蛋白、生長(zhǎng)激素和α-抗胰蛋白酶等重要的醫(yī)藥產(chǎn)品。
重組蛋白的N-糖型受培養(yǎng)條件影響：營(yíng)養(yǎng)水平、溶氧水平、PH、溫度、高應(yīng)激力、血清、微載體和培養(yǎng)基的添加物等。例如在生產(chǎn)過(guò)程中通過(guò)調(diào)整培養(yǎng)基中的錳、半乳糖和尿苷濃度可以控制N-糖的β1,4-半乳糖基化。此外，目前在重組糖蛋白的生產(chǎn)過(guò)程中幾個(gè)重要的糖基化控制點(diǎn)已經(jīng)被識(shí)別，如糖基化酶（半乳糖轉(zhuǎn)移酶4）和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。
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更新時(shí)間：2019-07-25
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